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細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)對(duì)人類社會(huì)的影響是不可估量的。近年來生物學(xué)的進(jìn)步在很大程度上依賴于細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。此外，基于細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)用技術(shù)在各個(gè)領(lǐng)域得到了發(fā)展，包括新藥的療效和毒性評(píng)估、疫苗和生物制藥的制造以及輔助生殖技術(shù)。隨著體細(xì)胞重編程最近在技術(shù)上變得可行，世界各地的研究人員正在激烈競(jìng)爭(zhēng)再生醫(yī)學(xué)發(fā)展的地位。同樣，在這一領(lǐng)域，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)也被視為進(jìn)一步發(fā)展和普及的基礎(chǔ)。
在研發(fā)這些培養(yǎng)基時(shí)，其主要目的是確保以低成本實(shí)現(xiàn)高細(xì)胞增殖率和生物量生長(zhǎng)，并避免頻繁補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。目前，根據(jù)添加的補(bǔ)充劑類型，合成培養(yǎng)基可分為幾種，例如，含血清培養(yǎng)基、無血清培養(yǎng)基、無蛋白培養(yǎng)基和化學(xué)成分明確的培養(yǎng)基。含血清的培養(yǎng)基含有各種血清衍生物質(zhì)，這使得培養(yǎng)基成分不明確，其濃度可能因批次而異。這種情況使培養(yǎng)結(jié)果的可重復(fù)性降低，并存在微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。然而，含血清的培養(yǎng)基可以很容易地配制出來，并有效地用于各種細(xì)胞類型，因?yàn)檠搴写罅康幕钚晕镔|(zhì)，這些活性物質(zhì)是動(dòng)物細(xì)胞存活和生長(zhǎng)所必需的。相比之下，無血清培養(yǎng)基具有確定的成分，從而實(shí)現(xiàn)結(jié)果的高可重復(fù)性，并且培養(yǎng)過程可以得到驗(yàn)證。此外，如果培養(yǎng)條件配置為有益于靶細(xì)胞，則可以在混合細(xì)胞群中選擇性地生長(zhǎng)靶細(xì)胞。在無血清培養(yǎng)基中，無蛋白培養(yǎng)基（不含任何蛋白質(zhì)）和化學(xué)成分明確的培養(yǎng)基（不含任何未定義成分）的亞組為培養(yǎng)系統(tǒng)提供了額外的穩(wěn)定性和可重復(fù)性，有助于識(shí)別細(xì)胞分泌物并降低微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。然而，無血清培養(yǎng)基很難設(shè)計(jì)：迄今為止，只有特定的細(xì)胞類型以這種方式培養(yǎng)。
目前，用于細(xì)胞培養(yǎng)的常用培養(yǎng)基配方已上市。因此，有些研究人員在使用培養(yǎng)基時(shí)一般不會(huì)了解其詳細(xì)信息和背景，特別是關(guān)于其開發(fā)的基本原理、確切成分以及這些培養(yǎng)基適合的細(xì)胞類型。
每種基礎(chǔ)培養(yǎng)基都是根據(jù)細(xì)胞類型、來源（動(dòng)物種類）和培養(yǎng)目的在每種情況下設(shè)計(jì)的。事實(shí)上，培養(yǎng)基成分可能會(huì)有很大差異。例如，MEM（由Eagle開發(fā)）是在有血清補(bǔ)充劑的假設(shè)下設(shè)計(jì)的，因此僅包含限度的必要成分（無機(jī)鹽、糖、必需氨基酸和水溶性維生素）。相比之下，用于無血清培養(yǎng)的培養(yǎng)基199和Ham's F-12含有各種其他成分。研究人員可以在實(shí)驗(yàn)比較后選擇幾種培養(yǎng)基。MEM、DMEM或Ham的F-12通常用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)；懸浮細(xì)胞一般選擇RPMI 1640培養(yǎng)基；用于無血清培養(yǎng)的混合培養(yǎng)基，如DMEM/F-12。
建立無血清培養(yǎng)，使用無血清培養(yǎng)系統(tǒng)時(shí)，有兩點(diǎn)需要注意。首先，在傳代培養(yǎng)過程中，可以在培養(yǎng)容器中選擇非預(yù)期的細(xì)胞克隆，因?yàn)闊o血清培養(yǎng)基比含血清培養(yǎng)基更能促進(jìn)特定細(xì)胞克隆或細(xì)胞亞型的增殖。其次，無血清培養(yǎng)基中的雜質(zhì)，無論是可避免的還是不可避免的，可能比含血清培養(yǎng)基對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的影響更大。此外，無血清培養(yǎng)還有其他注意事項(xiàng)，即盡量減少胰蛋白酶的濃度和粘附因子。
4-（2-羥1乙1基）-1-哌1嗪乙磺酸（HEPES）具有很強(qiáng)的緩沖能力，在培養(yǎng)基中可能具有緩沖作用。特別是當(dāng)培養(yǎng)的細(xì)胞在二氧化碳培養(yǎng)箱外處理時(shí)，使用HEPES的培養(yǎng)基的pH值比僅使用碳酸氫鹽的培養(yǎng)基更穩(wěn)定。它也可能對(duì)高細(xì)胞密度的培養(yǎng)有益，例如，當(dāng)pH值由于代謝物（如乳酸）的積累而迅速下降時(shí)。對(duì)于缺乏血清緩沖能力的無血清培養(yǎng)基，HEPES的pH緩沖作用可能更為重要。然而，HEPES可能對(duì)某些類型的細(xì)胞產(chǎn)生負(fù)面影響，例如雞胚骨骺軟骨細(xì)胞和小鼠胚胎干細(xì)胞（ES 細(xì)胞）。研究還表明，在培養(yǎng)基暴露于可見光期間，含有HEPES的培養(yǎng)基會(huì)產(chǎn)生更高水平的細(xì)胞毒性產(chǎn)物，主要是過氧化氫。
酚紅作為pH指示劑添加到培養(yǎng)基中，有時(shí)會(huì)影響細(xì)胞的增殖并顯示出雌激素活性。因此，測(cè)試酚紅的這些特性是否會(huì)影響他們的細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)結(jié)果，尤其是當(dāng)涉及雌激素敏感細(xì)胞（如乳腺細(xì)胞）時(shí)。
介質(zhì)的污染，不明來源的異物可能會(huì)污染培養(yǎng)基，從而可能影響實(shí)證結(jié)果。通常，這些污染物包括病毒、細(xì)菌、支原體和內(nèi)毒素。然而，還有其他類型的污染物，如增塑劑，可能會(huì)從塑料器械中洗脫出來，這些物質(zhì)也會(huì)影響培養(yǎng)物中的細(xì)胞。因此，研究人員可以考慮嚴(yán)格采用無菌技術(shù)，并謹(jǐn)慎選擇培養(yǎng)器械。在某些特殊情況下，建議在使用前立即用培養(yǎng)基清洗儀器。
培養(yǎng)基凍干粉應(yīng)用在制備皮膚修復(fù)、抗皮膚衰老、修復(fù)皮膚氧化應(yīng)激損傷和修復(fù)皮膚紫外線損傷的產(chǎn)品中，產(chǎn)品包括藥物、護(hù)膚品或化妝品。通過添加凍干保護(hù)劑將含有大量干細(xì)胞分泌物質(zhì)的條件培養(yǎng)基冷凍干燥成固體粉末，穩(wěn)定細(xì)胞因子性質(zhì)，使其能發(fā)揮最大的功效，特別是添加海藻糖除了能夠作為凍干保護(hù)劑，保護(hù)條件培養(yǎng)基中細(xì)胞因子的活性，同時(shí)海藻糖本身具有抗氧化作用，延緩細(xì)胞衰老。
傳統(tǒng)用于外周血淋巴細(xì)胞染色體制備采用的培養(yǎng)基一般為在液體狀態(tài)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基(如RPMI1640)的基礎(chǔ)上添加一定量血清和植物血球凝集素(PHA)而成。利用PHA對(duì)處于Gtl期的淋巴細(xì)胞的刺激作用，使之進(jìn)入分裂周期，從而能進(jìn)行染色體核型分析。但液體狀態(tài)的淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基不利于室溫下存放，其包含的活性物質(zhì)如谷氨酰胺、PHA等易失活。即使在2-8℃低溫存放一段時(shí)間后培養(yǎng)基，培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞中可進(jìn)行核型分析的處于分裂相數(shù)目顯著下降。利用凍干技術(shù)制備培養(yǎng)基凍干粉是解決上述問題的方法。但到目前為止，并沒有發(fā)現(xiàn)太多提供具體的培養(yǎng)基凍干工藝或方法的公開報(bào)道。
富睿捷培養(yǎng)基凍干
實(shí)驗(yàn)樣本：培養(yǎng)基
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>去除所有水分，凍干成粉末
實(shí)驗(yàn)設(shè)備：真空冷凍干燥機(jī)Venues2501
實(shí)驗(yàn)過程：
1.打開凍干機(jī)預(yù)冷。
2.將樣品分裝到合適的容器內(nèi)預(yù)凍。
3.將預(yù)凍好的樣品放入透明倉內(nèi)，啟動(dòng)凍干機(jī)。
4.凍干結(jié)束后，釋壓取出凍干好的樣品，儲(chǔ)存或者進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：凍干前后對(duì)比圖
